Государственная фармакопея Республики Беларусь -
Скачать (прямая ссылка):
Определение активности испытуемой вакцины. Готовят не менее трех серийных разведений испытуемой вакцины и соответствующие разведения препарата сравнения с использованием раствора натрия хлорида R концентрацией 9 г/л с добавлением алюминийсодержащего адъюванта, используемого в вакцине, или другого подходящего растворителя. Каждое из полученных разведений назначают одной из групп животных, каждому из которых вводят внутрибрюшинно не более 1,0 мл этого разведения. Одну группу животных не вакцинируют, а вводят внутрибрюшинно такой же объем растворителя. Через подходящий промежуток времени (например, от 4 до 6 недель) всех животных анестезируют и производят забор крови. Индивидуальные сыворотки хранят отдельно друг от друга. Выполняют количественное определение специфических антител против HBsAg в индивидуальных сыворотках, используя подходящий иммунохимический метод
(2.7.1).
Вычисления. Вычисления проводят обычными статистическими методами, используемыми для количественных определений с конечным числом возможных результатов (5.3).
Из распределения уровней реакции, измеренных для всех сывороток группы невакцинированных животных, определяют максимальный ожидаемый уровень реакции невакцинированного животного в данном количественном определении. При получении отклика, превышающего этот уровень, у вакцинированного животного, его по определению считают результатом сероконверсии.
Производят подходящее преобразование (например, пробит-преобразование) процентной численности животных с обнаруженной сероконверсией в каждой из групп и анализируют данные в соответствии с моделью параллельных линий логарифмической зависимости дозы от отклика. Активность препарата определяют относительно активности препарата сравнения.
Условия достоверности. Результаты испытания являются достоверными,
если:
- как для испытуемой вакцины, так и для препарата сравнения, Ей50 заключена в интервале между наибольшей и наименьшей дозами препарата, введенными животным,
- при статистическом анализе не выявляется отклонений от линейности и параллельности,
- границы доверительного интервала относительной активности находятся между 33% и 300% от оцененного значения активности.
Требования к активности. Верхняя граница доверительного интервала (Р = 0,95) оцениваемой относительной активности должна быть не менее 1,0.
ОПРЕДЕЛЕНИЕ IN VITRO
Выполняют иммунохимическое определение (2.7.1) содержания антигена с критериями приемлемости, валидированными в сравнении с испытанием in vivo.
Показано, что методы твердофазного иммуноферментного анализа (ELISA) и радиоиммунологического анализа (РИА) с использованием моноклональных антител, специфичных к индуцирующим защитную реакцию эпитопам HBsAg являются подходящими. Используют соответствующее число разведений испытуемой вакцины и препарата сравнения. Полученные данные, которые могут быть подвергнуты преобразованию, анализируют методом параллельных линий. Наборы для оценки HBsAg in vitro являются коммерчески доступными, и возможна адаптация методов их использования для определения активности in vitro.
Критерии приемлемости для данного препарата сравнения подлежат утверждению компетентными органами с учетом данных валидации.
2.7.16. КОЛИЧЕСТВЕННОЕ ОПРЕДЕЛЕНИЕ ВАКЦИНЫ КОКЛЮША (БЕСКЛЕТОЧНОЙ)
Способность вакцины вызывать образование специфических антител сравнивают с аналогичным свойством параллельно испытываемого препарата сравнения; антитела определяют с использованием подходящего иммунохимического метода (2.7.1), например, твердофазного иммуноферментного анализа (ELISA). В приведенном ниже описании испытания на мышах используется трехточечная модель, однако, после валидации, для рутинных испытаний может быть использован метод однократного разведения.
Вакцина сравнения. В качестве вакцины сравнения используют партию вакцины, эффективность которой показана клиническими испытаниями, или репрезентативную партию этой вакцины. Для приготовления репрезентативной партии необходимо строгое соблюдение технологического процесса при производстве партии, подвергающейся клиническим испытаниям. Стабильность вакцины сравнения должна быть документально подтверждена.
Требования. Способность вакцины вызывать образование антител не должна быть существенно ниже (Р = 0,95) по сравнению с аналогичным свойством препарата сравнения.
Следующая модель испытания приводится в качестве примера метода, пригодность которого для данного испытания подтверждена.
Отбор и распределение испытуемых животных. В испытании используют здоровых мышей (например, линии CD1) из одной партии возрастом от 4 до 8 недель. Животных распределяют по шести группам, состоящим из количества особей, достаточного для выполнения требований испытания. Используют три разведения испытуемой вакцины и три разведения препарата сравнения и назначают каждой из групп одно из разведений. Каждому животному внутрибрюшинно или подкожно вводят по 0,5 мл разведения, которое было назначено группе, к которой данное животное относится.
